Тема 15 серологические реакции: агглютинации (ра), непрямой гемагглютинации (Рига), кумбса (рк). Оборудование для постановки серологических реакций
Цель занятия. Ознакомить студентов с реакциями агглютинации, гемагглютинации и реакцией Кумбса, с техникой их постановки и учета результатов.
Оборудование и материалы. Культуры Е. coli различной серо-групповой принадлежности на МПА, О-агглютинирующие диагностические эшерихиозные сыворотки, бруцеллезный роз-бенгал антиген, положительная бруцеллезная сыворотка, планшеты с результатами титрования иммунной сыворотки в Рига, единый бруцеллезный антиген, мерные пипетки.
Серологические реакции рассмотрены последовательно в пяти темах (№ 15. 19).
Взаимодействие микробного антигена и антител носит строго специфический характер и направлено в животном организме на нейтрализацию возбудителя и его токсинов. Взаимодействие антигена и антител in vitro при определенных условиях сопровождают видимые феномены (агглютинация, преципитация, иммунный лизис), что позволяет использовать АГ—АТ-реакции, получившие название серологических (лат. serum — сыворотка), в практических целях. Биофабрики выпускают антигены и иммунные сыворотки (антитела) известной специфической направленности (диагностические). При помощи таких сывороток в серологических реакциях можно идентифицировать неизвестный микроорганизм или, применяя известный антиген, обнаружить в Организме антитела, синтезированные в ответ на внедрение возбудителя, и таким образом поставить диагноз (серологическая диагностика). Кроме того, серологические реакции можно использовать для оценки интенсивности иммунного ответа после вакцинации или перенесенной инфекционной болезни.
Сколько стоит шмот |Старая Рига |Новый способ брать интервью
Антигенные детерминанты корпускулярных антигенов специфически взаимодействуют с гомологичными антителами (специфическая, невидимая фаза реакции), а затем комплексы антиген — антитело образуют крупные, видимые невооруженным глазом конгломераты, которые выпадают в осадок — агглютинат (неспецифическая, видимая фаза реакции). Антигены и антитела взаимодействуют лишь в присутствии электролита (в 0,8%-м растворе хлорида натрия).
Реакция агглютинации (РА). Разработано несколько, вариантов реакции агглютинации, различающихся по методическому исследованию и цели исследования.
РА на стекле. 1. Для идентификации микроорганизма на обезжиренное предметное стекло наносят раздельно каплю известной агглютинирующей диагностической сыворотки, например сальмонеллезной, и каплю физиологического раствора (контроль). Затем бактериологической петлей берут бактериальную массу изучаемой культуры из колонии в чашке Петри или с поверхности скошенного МПА в пробирке и суспендируют раздельно в иммунной сыворотке и физиологическом растворе до получения гомогенной взвеси. Результат учитывают через 2. 4 мин.
Учет результатов: в контрольной пробе изменения должны отсутствовать. При специфическом соответствии культуры бактерий иммунной сыворотке появляются хлопья агглютината (положительный результат), в случае отсутствия феномена агглютинации делают заключениё о том, что исследуемая культура бактерии не соответствует иммунной сыворотке.
Простые методы самосовершенствования Торсунов О.Г. 12 июля 2017 Рига, Латвия
2. Обнаружение антител в исследуемой сыворотке крови рассмотрим на примере роз-бенгал пробы, применяемой при серодиагностике бруцеллеза. На предметное стекло наносят 0,3 мл исследуемой сыворотки крови животного и 0,03 мл бруцеллезного антигена (окрашенные розовым-бенгальским клетки бруцелл). Компоненты тщательно перемешивают покачиванием стекла и через 4 мин учитывают результат.
Пробирочная РА. 1. Обнаружение антител в сыворотке крови рассмотрим на примере РА для серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Схема постановки опыта приведена в таблице 7. Общий объем компонентов реакции 1 мл.
Одновременно по аналогичной схеме исследуют заведомо положительную и отрицательную сыворотки (положительный и отрицательный контроли).
Учет результатов начинают с контрольных пробирок — не должно быть спонтанной (неспецифической) агглютинации в 6-й пробирке (контроль антигена) и хлопьев осадка в 1-й пробирке (контроль сыворотки). В остальных пробирках наличие и интенсивность агглютинации учитывают визуально и оценивают в крестах: 1) (++++)— полная агглютинация — хорошо выраженный осадок и полное просветление жидкости (агглютинировало 100 % антигена); 2) (+++) — неполная агглютинация с хорошо выраженным осадком и со слабой опалесценцией жидкости (агглютинировало 75% антигена); 3) (++) —частичная агглютинация с небольшим осадком, надосадочная жидкость мутная (агглютинировало 50 % антигена); 4) (+) — очень небольшой осадок, жидкость непрозрачная (агглютинировало 25 % антигена); 5) (—) — отсутствие агглютинации, осадка нет, жидкость мутная.
Из приведенного примера (табл. 8) видно, что антиген специфичен, так как отсутствует спонтанная агглютинация с физиологическим раствором и нормальной (отрицательной) сывороткой, и активен — взаимодействует с заведомо положительной сывороткой. Следовательно, можно учитывать результаты РА с исследуемой сывороткой крови. Титр исследуемой сыворотки (титр антител) в данном случае составляет 1: 200.
Пробирочную РА используют не только для серодиагностики инфекционных болезней, но также для оценки активности диагностических агглютинирующих сывороток или интенсивности поствакционального иммунологического ответа.
Количество антител может служить диагностическим критерием. Под диагностическим титром понимают минимальное количество антител к данному антигену в исследуемой сыворотке, заведомо превышающее количество нормальных антител к используемому в реакции антигену в сыворотке животного того же вида. При диагностическом титре антител и выше животное рассматривают как больное или переболевшее. При некоторых инфекцияхэтот подход не всегда продуктивен, и тогда исследуют «парные сыворотки», т. е. сыворотки, взятые от животного дважды с интервалом три-четыре недели, причем первую пробу необходимо брать не позднее двух-трех суток после появления клинических симптомов болезни. На активный инфекционный процесс указывает существенное повышение титра антител во второй пробе.
2. Для идентификации микроорганизмов используют пробирочную РА, если из-за антигенного родства с различными видами или внутривидовыми сероварами в РА на стекле микроорганизм идентифицировать не удалось.
Например, если культура Е. coli дает в РА на стекле положительный результат одновременно с иммунными сыворотками против нескольких О-серогрупп, ее испытывают как антиген с теми же сыворотками уже в пробирочной РА и относят к той О-серогруппе, с сывороткой которой она дает максимальные титры (см. тему 29).
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). Данную реакцию относят к серологической реакции осадочного типа. В ней используют растворимые микробные антигены, сорбированные на эритроцитах как носителях (антигенный диагностикум), или сорбированные на эритроцитах антитела известной иммунной сыворотки (антительный диагностикум). Антигенные диагности-кумы применяют для серологической диагностики, антительные — для обнаружения антигенов в исследуемом материале.
Приготовление антигенных диагностикумов. Дефибринированную кровь отмывают ФСБР (рН 7,2) три раза. Для стабилизации (фиксации) эритроциты обрабатывают формальдегидом, глутаровым или акриловым альдегидом. Наиболее распространена формалинизация эритроцитов: 50%-ю суспензию эритроцитов смешивают с 50%-м раствором формалина в соотношении 1:1, выдерживают, периодически встряхивая, при 37 ºС 2 ч и затем отмывают ФСБР три раза.
Эритроциты легко сорбируют на своей поверхности полисахариды, а после обработки танином и белки. Танинизацию проводят, смешивая 2,5%-ю суспензию эритроцитов и раствор танина (1:20 ООО) в соотношении 1:1с последующим выдерживанием при 37 °С в течение 15 мин. Затем эритроциты отмывают ФСБР (три раза) и доводят концентрацию до исходной. Для сенсибилизации 1 мл 2,5%-й взвеси отмытых таннизированных эритроцитов объединяют с 1 мл антигена и 4 мл ФСБР (рН 6,4) и выдерживают при 37ºС 2 ч. После сенсибилизации эритроциты отмывают три раза и суспендируют в ФСБР (рН 7,2), который содержит 1 % нормальной кроличьей сыворотки, обеспечивающей стабильность суспензии. Следует отметить, что оптимальное количество антигена для сенсибилизации эритроцитов определяют опытным путем в каждом случае.
Обнаружение антител в сыворотке крови. Сыворотку крови перед исследованием инактивируют в водяной бане при 56 °С 30 мин и проверяют на наличие антител к антигенам собственно эритроцитов. Для удаления антиэритроцитарных антител исследуемую сыворотку крови предварительно адсорбируют несенсибилизированными эритроцитами.
РНГА на стекле применяют для диагностики пуллороза — тифа птиц (качественная кровекапельная реакция непрямой гемагглютинации — ККРНГА). На сухое обезжиренное стекло глазной пипеткой наносят антиген и свежую кровь (в соотношении 1:1), взятую из гребня или подкрыльцовой вены птицы, и смешивают, покачивая стекло. Реакцию считают положительной при выпадении в течение двух минут в смеси крови с антигеном хлопьев коричневого цвета. Параллельно ставят контроли с позитивной и негативной сыворотками.
Пробирочная РНГА рекомендована для серологической диагностики многих инфекционных болезней. Например, для диагностики сальмонеллезов используют количественную РНГА. Эритроцитарный антиген содержит О-антигены сальмонелл. Исследуемую сыворотку разводят физиологическим раствором в полистироловых планшетах в объеме 0,5 мл от разведения 1: 100 до 1: 800.
Затем в каждую лунку вносят 0,25 мл диагностикума. Компоненты перемешивают покачиванием планшета и выдерживают в термостате при 37 ºС 2. 2,5 ч. Результат РНГА оценивают в крестах (рис. 58): 1) (++++) —все эритроциты агглютинированы и в виде «зонтика» покрывают дно лунки; 2) (+++) — агглютинированы почти все эритроциты. На фоне «зонтика» сформировано малозаметное кольцо из осевших неаг-глютинированных эритроцитов; 3) (++) или (+) — «зонтик» плохо выражен, заметен осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде кольца; 4) (—) — эритроциты не склеены и осели на дно в виде узкого колечка с ровными краями либо в виде пунктата или колечка.
Параллельно ставят контроли с заведомо положительной и отрицательной сыворотками. Реакция Кумбса (РК). Данная серологическая реакция также основана на феномене агглютинации.
Предназначена для выявления так называемых «неполных» антител, у которых только один активный центр, и по этой причине они могут специфически взаимодействовать с детерминантами антигена, но реакция не завершается формированием макроскопически видимых комплексов антиген — антитело. В частности, РК используют для серодиагностики бруцеллеза животных.
Предварительно сыворотки крови исследуют в обычной пробирочной РА. Исходя из результатов РА, для исследования берут пробирки с разведениями сыворотки, где нет агглютинации, но возможно произошло специфическое связывание «неполных» антител с бруцеллезными антигенами. Антиген из этих пробирок отмывают от несвязавшихся (свободных) белков сыворотки крови центрифугированием. К отмытому осадку корпускулярного бруцеллезного антигена добавляют 1 мл разведенной антиглобулиновой сыворотки, содержащей антитела к иммуноглобулинам сыворотки крови животных того вида, который исследуют на бруцеллез. Пробирки со смесью выдерживают при 37 ºС 18 ч, затем при комнатной температуре 2. 4 ч.
Учет результатов: в положительном случае бруцеллезный антиген будет агглютинировать, так как полные антитела антиглобулиновой сыворотки взаимодействуют с «неполными» антителами на поверхности бруцелл и вызывают агглютинацию корпускул антигена.
Оборудование для постановки серологических реакций. При массовых серологических исследованиях, определении титра сывороток используют оборудование, с помощью которого можно облегчить процедуру разведения сывороток, внесения компонентов реакции: автоматические пипетки, аппарат Флоринского, микротитратор «Такачи».
Аппарат Флоринского: благодаря групповой автоматической пипетке (рис. 59) одновременно разводят 10 сывороток крови или вносят компоненты в 10 стандартных серологических пробирок, размещенных в 100-гнездном штативе (10 х 10).
Микротитратор «Такачи» включает в себя полистироловые пластины (129 x 93 мм) с лунками, разбавители — устройства для взятия и разведения сывороток в объеме 0,025 и 0,05 мл, стеклянные пипетки-капельницы для разлива предусмотренных условиями опыта объемов растворителя. При помощи стеклянных пипеток, на которые надета капельная насадка в виде пластмассового конуса со стальной трубочкой внутри, разливают по лункам пластины физиологический раствор либо буферный раствор в объеме 0,025 мл (одна капля) или 0,05 мл (две капли).
Капли определенного объема (0,025 мл) формируются при условии, что пипетку держат строго вертикально на расстоянии 1 см от пластины (рис. 60, а). Затем при помощи разбавителей берут необходимое количество сыворотки крови. Разбавитель представляет собой тонкие металлические стержни с наконечниками полусферической формы, состоящими из пластин с вертикальными прорезями.
Ось стержня выступает впереди наконечника, что предохраняет его от повреждений. Обычно одновременно используют несколько разбавителей и держат их веерообразно (рис. 60, б).
Головки разбавителей с сывороткой помещают в лунки первого ряда, вращая ось, перемешивают сыворотку с раствором, затем переносят разведенную сыворотку в следующий ряд лунок, обеспечивая при этом ее разведение в два раза и т.д. (рис. 60, в). На завершающем этапе в лунки с помощью капельной пипетки вносят остальные компоненты реакции (рис. 60, г). Эти приспособления можно применять при постановке многих серологических реакций (РА, РСК, РНГА и т. д.).
Для внесения компонентов реакции в лунки планшетов все чаще используют 4-, 8- и 12-канальные автоматические пипетки с изменяющимися объемами (5. 250 мкл) и пластиковые наконечники.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Идентифицировать культуры эшерихий и сальмонелл в РА на стекле с О-агглютинирующими сыворотками.
Источник«Рижский метод закаливания в оздоровление детей дошкольного возраста»
методическая разработка (младшая группа) по теме
Все мы знаем, что с помощью такой простой процедуры, как закаливание организма, можно не только поправить здоровье, но и стабилизировать психоэмоциональное состояние. Особенно важно проводить закаливание в детском возрасте, когда ребенок только начинает формироваться физически и психологически. Специально для дошкольников еще в 80-е годы была разработана методика рижского закаливания. В чем заключается рижский метод закаливания? Название метода пришло из Прибалтики, где было замечено, что дети, бегающие босиком по прохладной воде и песку Рижского взморья, практически не болеют простудными заболеваниями.
Для данного метода закаливания используется три дорожки из грубого полотна (мешковина, дерюга и пр.) шириной 0,4 м и длиной 1,5 м. Одна из них смачивается в 10% растворе поваренной соли (1 кг соли на ведро воды) комнатной t. Другая в чистой воде такой же t. Третья дорожка остается сухой. Дорожки выстилаются на полу в следующей последовательности: «соленая» дорожка, дорожка, смоченная обычной водой и сухая.
Дети шаркающим шагом проходят по очереди по всем дорожкам. Прохождение можно повторить 2-3 раза и совместить его с хождением по ребристой доске или по «Дорожке Здоровья».
«Дорожка Здоровья» представляет собой полосу из ткани с нашитыми на нее мелкими предметами: пуговицы, бусинки, плетеные веревочки, шнуры и другие объемные предметы, безопасные для ребенка. Можно использовать коврик для ванной типа «травка». Подобные дорожки используют для профилактики плоскостопия и являются активными раздражителями рецепторов, находящихся на стопе ребенка.
Я уверенна, что ваш ребенок с удовольствием будет закаляться по рижскому методу, тренируя сосуды ступней и невольно стимулируя работу эндокринной и нервной систем. Будьте здоровы!
ИсточникЧто такое метод Рига
Диагностика бактериальных инфекций. Бактериологическое и серологическое исследование
Бактериологический метод включает бактериоскопию материала от больного, выделение чистой культуры возбудителя и его идентификацию с определением чувствительности к антибиотикам и химиопрепаратам.
Выбор материала для исследования бактериоскопическим методом зависит от предполагаемой этиологии заболевания, стадии болезни с учетом ее патогенеза, биологических свойств возбудителя и других моментов.
1. При инфекционных болезнях, протекающих с бактериемией (брюшной тиф, генерализованные и септические формы сальмонеллеза); при сепсисе любой этиологии, вызываемом не только гноеродной кокковой микрофлорой, синегнойной палочкой, но и более редкими ее возбудителями (Serratia Salinaria, неферментирующие бактерии, анаэробы, L-формы стрептококка (метод Сукнева) и другие микроорганизмы), прибегая в этих случаях к посевам на специальные питательные среды. Следует подчеркнуть, что успех частоты и спектр выделяемых возбудителей из крови и других биологических секретов больного зависят от эрудиции, пытливости, настойчивости и упорства работников бактериологической лаборатории.
2. Спинномозговая жидкость (гнойные менингиты; туберкулезный менингит при длительном выращивании (более месяца) на специальных для выделения туберкулезных бактерий питательных средах.
3. Мокрота (острые пневмонии и трахеобронхиты, туберкулез, коклюш, чума, редкие формы брюшного тифа (пневмотиф), легионеллез, респираторный микоплазмоз и хламидиозы).
4. Слизь, гной с миндалин (стрептококковые и стафилокковые ангины).
5. Налет и слизь с миндалин, из зева и носа, отделяемое с конъюнктивы, половых органов (дифтерия).
6. Соскоб со слизистой носа (проказа).
7. Отделяемое из носа и ротоглотки (синуиты, озена, риносклерома).
8. Отечная жидкость, кусочки пораженных мышц, некрозированные ткани (анаэробные инфекции); отделяемое ран (ботулизм; в случае необходимости и столбняк).
9. Пунктат из увеличенных лимфоузлов (туберкулез, токсоплазмоз).
10 Содержимое карбункула и пунктат из нагноившихся лимфоузлов (чума, туляремия, септикопиемия, сибирская язва).
Бактериологические исследования при особо опасных инфекциях (чума, туляремия, бруцеллез, холера (при которой исследуются только испражнения(!)) выполняются в специальных режимных лабораториях, исключающих возможность самозаражения ее сотрудников при работе с бактериальными культурами и распространение возбудителей за пределы этих лабораторий.
Серологические исследования. Внедрены в клинику несколько позднее бактериологического метода, предложенного Р. Кохом. В 1896 г. Ф. Видаль обнаружил, что сыворотки крови больных брюшным тифом к концу 1-й недели болезни приобретают способность агглютинировать брюшнотифозную палочку — возбудителя брюшного тифа (положительная реакция Видаля). При полимикробной этиологии инфекционных болезней после открытия Видаля стали также прибегать к определению титров сывороточных агглютининов к выделяемым из патологического материала нескольким видам бактерий (реакция аутовидаля) и контролировать их динамику в зависимости от стадии болезни. Наиболее высокие титры агглютининов к одному из видов выделенных бактерий свидетельствуют в пользу его большей этиологической причастности к развитию болезни.
Уже в начале применения реакции Видаля в клинике было замечено, что самые тяжелые формы, например, брюшного тифа могут протекать при отсутствии в крови агглютининов (отрицательная реакции Видаля), что указывает на относительную диагностическую ценность этого метода как при брюшном тифе, так и при других инфекционных болезней. Позднее он был заменен более чувствительными серологическими методами. Но приоритетное значение открытия Видаля останется навсегда.
В настоящее время для серологической диагностики бактериальных инфекций применяют более чувствительные методы, когда антиген бактерий сорбируют на поверхности эритроцитов (эритроцитарные диагностикумы1). Таким образом, были разработаны принципиально новые серологические реакции: прямой (РПГА) и непрямой гемагглютинации (Рига).
Они широко применяются для серологической диагностики многих бактериальных, вирусных и других инфекций (брюшного тифа, сальмонеллеза, шигеллезов, бруцеллеза, туляремии и др.). Сохраняет свое диагностическое значение реакция преципитации при некоторых заболеваниях (ботулизме и сибирской язве — реакция Асколи для ее диагностики у животных). В серодиагностике особенно широко в настоящее время применяется реакция связывание комплемента (РСК), предложенная в 1901 г. французскими исследователями Борде и Жангу (сифилис, гонорея, бруцеллез, токсоплазмоз, туберкулез, проказа, сап). РСК имеет наибольшее значение для серодиагностики вирусных инфекций (грипп, другие ОРВИ, герпес, энцефалит, эпидемический паротит, орнитоз и др.), а также многочисленных риккетсиозов.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Что такое метод Рига
Не можете записать ребёнка в сад? Хотите рассказать о воспитателях? Знаете, как улучшить питание и занятия?
РИЖСКИЙ МЕТОД ЗАКАЛИВАНИЯ
Все мы знаем, что с помощью такой простой процедуры, как закаливание организма, можно не только поправить здоровье, но и стабилизировать психоэмоциональное состояние. Особенно важно проводить закаливание в детском возрасте, когда ребенок только начинает формироваться физически и психологически.
Специально для дошкольников еще в 80-е годы была разработана методика рижского закаливания. В чем заключается рижский метод закаливания? Название данной методики пришло к нам из Прибалтики. Дети, целыми днями бегающие по песку и в прохладной воде Рижского взморья, крайне редко болеют простудными заболеваниями.
Работники дошкольных заведений отметили этот факт и решили сымитировать те же условия для детей в детском саду. Методика рижского закаливания обрела огромную популярность, поэтому ее стали практиковать во всех уголках бывшего Советского Союза. К слову, этот способ укрепления детского организма пользуется успехом и по сегодняшний день.
Итак, для рижского закаливания требуется подготовить три дорожки грубой ткани (ковролин, дерюга, мешковина) длиной не менее полутора метров. Одна дорожка смачивается в 10% растворе морской соли. Для этого нужно 1 кг соли растворить в ведре воды. Не секрет, что в этом продукте содержится огромное количество минералов, оказывающих сильное укрепляющее действие на детский организм.
Солевая дорожка — отличная защита от плоскостопия, которое вызывается ослаблением голеностопных связок. Закаливание таким методом относится к процедурам лечебной физкультуры. Если нет ковролина, то можно расстелить на полу клеенку или другой плотный материал, насыпать туда 500-600 г крупной морской соли и попросить малыша походить по такому импровизированному «песку».
Выполнение этого упражнения позволяет улучшить кровоток в ногах, снимает мышечное напряжение и укрепляет иммунитет. Вернемся к закаливанию. Вторую дорожку смачивают в чистой воде, а третью оставляют сухой.
После того как все «инструменты» для закаливания подготовлены и расстелены на ровной поверхности, деткам предлагают «шаркающим» шагом пройтись по дорожкам: сначала по соленой, потом — по мокрой, и в завершение — по сухой. Такую прогулку можно повторить 5 раз. Однако, на первых этапах закаливания лучше ограничиться тремя повторами упражнений.
При этом очень важно следить за кожей ступней ребенка: если после второго раза она достаточно разогрета, то можно на этом остановиться. Обращаем ваше внимание на то, что данная методика является еще и отличной профилактикой плоскостопия, особенно когда сухой коврик оснащен массажными иголочками. Кроме того, положительный эффект от закаливающих процедур можно усилить, совместив рижский метод с контрастным обливанием ног. Раздражение множества рецепторов и приятное ощущение жара доставляют ребенку удовольствие. А наградой за регулярные закаливающие процедуры станет веселый и здоровый малыш!
Коврик для закаливания своими руками
Массажный коврик для стимулирования работы всех систем растущего организма и профилактики плоскостопия можно изготовить самостоятельно, закрепив на куске ковролина различные предметы. Это могут быть крышечки от пластиковых бутылок, пуговки, бусины, колпачки от фломастеров, кусочки плотной ткани. Можно разнообразить дорожку аппликацией в виде отпечатков ног или лапок. Главное, чтобы
поверхность коврика или дорожки для закаливания была достаточно рельефной для стимуляции ступней, но при этом не приносила болевые ощущения. Закрепленные на основе предметы пришивают к куску ковролина или используют для крепежа профессиональный степлер. Еще один вариант массажного коврика, который станет приятным напоминанием о лете, выполнен из настоящей морской гальки.
Гладкие плоские камешки приятны на ощупь, поэтому ребенок будет с удовольствием использовать коврик во время закаливающих процедур. Сделать его очень просто: на кусок плотного ковролина при помощи нетоксичного клея как можно ближе друг к другу прикрепите камешки. Они могут быть среднего размера: не слишком крупными, но и не совсем крошечными.
Основная задача такого коврика — создавать различное давление на ступню ребенка, не травмируя и не причиняя неприятных ощущений. Согласитесь, что дорожка для закаливания, выполненная своими руками, гораздо интереснее, чем купленная в магазине. Мы уверены, что ваш ребенок с удовольствием будет закаляться по рижскому методу, тренируя сосуды ступней и невольно стимулируя работу эндокринной и нервной систем. Будьте здоровы!
Источник